黑曲霉原生质体的制备、再生及转化条件

黑曲霉原生质体的制备、再生及转化条件

为了建立原生质体介导的黑曲霉转化系统,研究了菌龄、酶系统、渗透压稳定剂、酶解时间对葡萄糖淀粉酶生产菌株黑曲霉CICIM F0410原生质体形成与再生的影响.结果表明,培养4 d的幼嫩菌丝体最适于制备原生质体;综合考虑原生质体形成与再生的情况,作者选用1 mol/L山梨醇为最适渗透压稳定剂,1 g/dL蜗牛酶-1 g/dL纤维素酶-0

.1 g/dL溶壁酶为最适裂解酶组合,30 ℃酶解2.5～3 h,最适合的原生质体的再生培养基为含0.6 mol/L MgSO4的TZ培养基.在PEG和CaCl2存在条件下,以潮霉素B为选择性标记,质粒pBC-Hygro转化原生质体,每微克DNA可获得4～5个转化子.

作 者： 姚婷婷 王正祥 YAO Ting-ting WANG Zheng-xiang 作者单位： 江南大学,工业生物技术教育部重点实验室,江苏,无锡,214036 刊 名： 食品与生物技术学报 ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 200625(4) 分类号： Q786 关键词： 黑曲霉 原生质体 制备 再生 转化