PNH病理研究论文【优选3篇】
PNH病理研究论文 篇一：PNH病理研究的进展与治疗方法探讨
引言：
PNH（Paroxysmal Nocturnal Hemoglobinuria）是一种罕见的血液疾病，主要特点是红细胞表面的糖脂结构异常，导致溶血和血栓形成。近年来，对于PNH的病理研究取得了一些重要进展，同时也发展出了一些有效的治疗方法。本文将对PNH的病理研究进展以及治疗方法进行探讨。
病理研究进展：
1. 病因探讨：PNH的病因一直以来都是一个难题。近年的研究发现，PNH主要与PIGA基因突变有关，该基因编码的蛋白质是细胞膜上糖脂结构的重要组成部分。PIGA基因突变会导致细胞膜上的糖脂结构异常，进而导致PNH的发生。
2. 病理变化描述：PNH的病理变化主要表现为红细胞表面的糖脂结构异常。这些异常的糖脂结构会导致免疫系统攻击红细胞，引发溶血反应。此外，PNH患者还容易出现血栓形成，这与红细胞表面糖脂结构异常导致血小板和凝血因子的异常激活有关。
治疗方法探讨：
1. 免疫抑制剂治疗：免疫抑制剂是目前治疗PNH的主要方法之一。通过抑制免疫系统的异常激活，可以减轻溶血反应和血栓形成的症状。常用的免疫抑制剂包括环孢素A和马来酸酯。
2. 补体抑制剂治疗：PNH的发生与补体系统的异常活化有关。因此，补体抑制剂的应用也成为治疗PNH的一种选择。当前最常用的补体抑制剂是厄洛替尼，可以有效抑制补体系统的异常激活，减少溶血和血栓形成。
结论：
PNH的病理研究进展使我们更加了解这一罕见疾病的发生机制，从而为治疗提供了新的思路。目前，免疫抑制剂和补体抑制剂是治疗PNH的主要方法，但仍需进一步研究和临床实践来寻找更加有效的治疗手段。
PNH病理研究论文 篇二：PNH病理研究的诊断和预后评估方法探讨
引言：
PNH（Paroxysmal Nocturnal Hemoglobinuria）是一种罕见的血液疾病，对于其准确的诊断和预后评估一直是一个挑战。近年来，随着对PNH病理研究的深入，一些诊断和预后评估方法也得到了发展。本文将对PNH的病理研究在诊断和预后评估方面的进展进行探讨。
诊断方法探讨：
1. 流式细胞术：流式细胞术是目前诊断PNH的主要方法之一。通过检测红细胞表面的糖脂结构异常，可以判断患者是否患有PNH。该方法具有高度准确性和灵敏度，并且可以同时检测不同克隆的细胞。
2. 基因检测：随着对PNH病因的了解，基因检测也成为诊断PNH的一种方法。通过检测PIGA基因的突变，可以确定患者是否存在PNH。基因检测可以提供更加准确和可靠的诊断结果。
预后评估方法探讨：
1. 血细胞分析：PNH患者的血细胞分析可以提供预后评估的重要指标。例如，PNH血细胞中CD55和CD59的表达水平可以反映病情的严重程度。此外，还可以通过测定血细胞中溶血产物的浓度来评估治疗效果和预后。
2. 凝血功能检测：血栓形成是PNH的一个主要并发症，因此凝血功能检测也是预后评估的重要内容之一。通过检测凝血因子、纤维蛋白原等指标的变化，可以判断患者是否存在血栓风险。
结论：
PNH的病理研究在诊断和预后评估方法的发展中起到了重要作用。流式细胞术和基因检测是目前诊断PNH的主要方法，而血细胞分析和凝血功能检测可以为预后评估提供重要指标。随着对PNH病理的深入研究，我们有望发现更加准确和有效的诊断和预后评估方法，从而为患者提供更好的治疗和护理。
PNH病理研究论文 篇三
PNH病理研究论文
阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)是一种获得性造血干细胞克隆性疾病，以发作性血管内溶血、静脉血栓形成、骨髓造血功能衰竭为主要表现。近年来，PNH的发病率有增高趋势，北方多于南方，半数以上发生在20～40岁，个别10岁以下及70岁以上，男性多于女性。我国患者多以贫血、出血、血红蛋白尿为首发症状，合并血栓者少见。该病虽为良性克隆性疾病，但起病急骤，病情反复，迁延不愈，生存质量差，存活期短。因此，深入研究其病理机制，探讨新的治疗思路是目前亟待解决的难题。
众所周知，PNH是由于患者造血干细胞中PIG-A基因发生突变，导致细胞膜表面糖化磷脂酰肌醇(GPI)锚合成障碍，从而使血细胞膜表面GPI锚连蛋白缺失，如CD55、CD59等，使细胞抵抗补体攻击的能力减弱，导致细胞容易被破坏，发生溶血及全血细胞减少。但目前多种研究已显示PIG-A基因突变本身并不能赋予PNH克隆增殖优势，PNH的发病还需其他因素参与。现就PNH病理机制介绍如下。
1PIG-A基因突变
PIG-A基因编码484个氨基酸的蛋白产物———α1-6-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶的一个亚基，该酶参与GPI锚连蛋白的合成过程。PNH的PIG-A基因突变是异质性的，突变位点各不相同。目前，已经报道的PIG-A基因突变有100多种，随机发生于整个编码区，没有突变丛集区或热点，第2号外显子是PIG-A基因中最大的一个外显子，发生突变的频率最高，大多数突变形式(约占2/3)为小的碱基插入或缺失，其中缺失更为常见。我们的课题组对PNH及再生障碍性贫血(AA)-PNH患者骨髓单个核细胞的PIG-A基因进行突变形式检测，结果示部分中国PNH患者的突变类型多表现为单个碱基置换，且发生部位均不相同(待发表)。该研究结果支持PIG-A基因突变的高发性和随机性，PIG-A基因突变导致GPI锚连蛋白的减少或缺失，可能赋予PNH细胞一定的生长优势，致PNH克隆扩增。
然而，近年来的研究发现，PIG-A基因突变在正常人血细胞中偶尔也可检测到，但只有PNH患者体内的PNH造血干细胞表现出生长优势，克隆性增殖，并最终导致了PNH发病。最近一些研究也提示，健康对照者中大多数PIG-A基因突变发生在集落形成细胞水平，而不是造血干细胞水平，因为集落形成细胞没有自我更新能力，所以在健康对照者中发现的PIG-A基因突变与PNH的病理生理无关联或关联性很低。因此，PNH克隆增殖是PNH发病的必要条件之一，PIG-A基因突变是PNH克隆增殖的前提，然而单纯PIG-A基因突变并不足以致PNH克隆增殖。PNH克隆增殖优势一定还依赖于除PIG-A基因突变之外的其他机制参与。
2免疫逃避机制
最近的研究表明，单纯PIG-A基因突变并不导致PNH克隆先天生长优势。那么，究竟是何种因素导致PNH干细胞克隆性增殖，从而导致PNH发病?近年来，有学者提出假设:PNH患者体内存在由T淋巴细胞介导的自身免疫反应，使自身免疫系统选择性地攻击正常造血干细胞，而PNH克隆因缺乏GPI锚连蛋白可逃避该免疫攻击，从而获得生长优势。两因素协同作用才导致PNH发病，这也被称为PNH的双因素发病学说。这一假说得到了直接和间接的证据。(1)直接证据:Risitano等研究了PNH患者的T细胞受体β链可变区互补决定区3(TCR-VβCDR3)的序列，发现PNH患者的TCR-VβCDR3与正常人不同，呈偏态非高斯分布，以CD8+T淋巴细胞为甚。基于TCR-VβCDR3可鉴别不同克隆T细胞群的理论，实验结果提示该T细胞群为寡克隆，且其中可能含有异常增殖的T细胞克隆。Mer-chav等将1例PNH患者的骨髓单个核细胞进行体外培养，去除T淋巴细胞后，其集落的产率较不去除明显增加(4.5倍)，与正常对照相比，差异有统计学意义。在培养体系中加入甾体类药物后，T淋巴细胞对集落形成的抑制作用明显减弱。这些实验提示T淋巴细胞介导的免疫机制参与了PNH的发病。(2)间接证据:曾先后有使用抗人胸腺细胞免疫球蛋白(ATG)治疗PNH部分有效的报道，从另一侧面证实了PNH的`发病机制中有T细胞免疫的参与。
PNH患者体内存在T细胞介导的免疫反应，那么，PNH患者体内的T淋巴细胞本身是否存在异常?国内外很多学者对此进行了研究，均已证实PNH患者体内存在PNH克隆型的T淋巴细胞，且存在CD3+CD4+/CD3+CD8+细胞比例倒置、T淋巴细胞基因的异常、T淋巴细胞表面免疫抑制性受体超家族的表达存在异常、T淋巴细胞功能的异常。
本课题组在国内外研究基础上也进行了较为深入的研究:(1)PNH患者CD4+T淋巴细胞比例较正常对照组明显下降，CD8+T淋巴细胞比例较正常对照组明显升高，CD4+/CD8+T淋巴细胞比例倒置，Th1细胞比例较正常对照组明显升高，这些变化均以AA-PNH患者更为明显，且与患者血象及骨髓增生情况呈负相关。提示PNH患者T淋巴功能亢进，细胞免疫向Th1方向极化，淋巴因子的分泌失调，可产生过量的造血负调控因子，如白介素(IL)-2、干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α等，从而表现出明显的造血抑制活性，导致PNH患者造血功能受抑，骨髓衰竭。(2)探讨了GPI－T淋巴细胞和GPI+T淋巴细胞的数量和功能，结果显示PNH患者体内存在一定数量的GPI－T淋巴细胞，其占T淋巴细胞的比例明显低于PNH克隆占粒系、红系、单核系的比例;其更易出现在AA-PNH患者体内;其占CD8+T淋巴细胞的比例高于占CD4+T淋巴细胞的比例;其CD69的表达率明显高于正常对照，与GPI+T淋巴细胞CD69的表达率相似，与患者血象及骨髓增生程度负相关。提示患者GPI+、GPI－T淋巴细胞功能均升高，细胞免疫亢进，这种亢进破坏了患者的造血功能，但与T淋巴细胞的来源无关。
3二次基因突变
PIG-A基因突变和免疫机制介导的骨髓损伤对PNH克隆扩增是必需的，但仅有二者并不足以致PNH发病。PNH克隆在体内获得生存及增殖优势可能与二次基因突变有关。到目前为止，研究发现主要有HMGA2基因突变、次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(HPRT)基因突变、抗凋亡基因(EGR-1基因、TAXREB107基因)、WT1基因及HLA-DR的表达异常与PNH克隆的增殖优势相关。
人类HMGA2基因位于12号染色体的q15区，又称构建转录因子，调节大量靶基因的转录，该基因在胚胎发生过程中高表达，正常成熟组织中无表达或微量表达。HMGA2还启动间质肿瘤的形成，人类良性间质肿瘤中最常见。HMGA2可通过负性调节ERCC1启动子抑制核苷酸的切除修复途径，抑制DNA损伤的修复，导致基因不稳定。该基因被认为是发生染色体重排的高频靶点之一。PNH克隆属骨髓造血干细胞的非肿瘤性增殖，上述研究结果说明HMGA2基因的异位表达和PIG-A基因突变共同参与了PNH克隆增殖，即PNH患者可能存在二次基因突变现象。
HPRT基因定位于X染色体q26～27区域，编码次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶，参与体内嘌呤核甘酸的补救合成途径，此酶的特异性不强，可将嘌呤类似物6-巯代鸟嘌呤(6-TG)掺入到DNA中而引起细胞死亡。目前应用抗6-TG方法检测体细胞HPRT基因突变，如果培养体系中含有6-TG，在HPRT作用下，6-TG能掺入到新合成的DNA中，阻止DNA半保留复制，导致细胞死亡;而HPRT基因突变的细胞由于不能编码生成HPRT，不影响DNA复制，细胞仍能存活。
EGR-1基因介导细胞的增殖、分化及多能造血干细胞的自我更新。WT1基因编码一种转录因子，可以激活或者抑制靶基因的转录调控，参与多种细胞包括造血干细胞的生长、分化及凋亡过程。既往有研究显示，PNH患者EGR-1基因及WT1基因较正常人呈现高表达水平，且PNH患者WT1基因在BMMNCs的表达与粒系CD16b表达比例呈正相关，说明EGR-1基因和WT1基因mRNA表达水平与PNH克隆有关，PNH克隆的扩增需要除外PIG-A基因突变之外的其他基因缺陷的参与。本课题组利用流式细胞分选技术将PNH患者的CD59－细胞分选出来，检测其EGR-1基因和WT1基因mRNA的表达水平。结果显示PNH患者GPI缺陷细胞(CD59－细胞)EGR-1基因和WT1基因mRNA的表达水平均显著高于同一PNH患者的CD59+细胞及正常对照组，且上述两种基因的相对表达量与CD59－细胞数量呈显著正相关关系，即EGR-1基因和WT1基因的表达与PNH克隆增殖相关(待发表)。由此证实除PIG-A基因突变之外，PNH患者EGR-1基因及WT1基因的过度表达对PNH克隆取得增殖优势可能起到促进作用。
核糖体蛋白L6(RPL6)又称Taxreb107，是HTLV-1原癌蛋白Tax应答序列结合蛋白，Tax是人类T淋巴细胞白血病病毒编码的转录因子，Taxreb107/RpL6可能通过与Tax的相互作用而调节Tax在病毒感染中的作用。目前关于Taxreb107基因的功能还未完全阐明，已明确的是其在促红细胞生成过程的正调控作用。有研究7例PNH中，3例TAXReb107基因呈现过度表达，提示TAXReb107作为一种抗凋亡基因，可能参与了PNHGPI－细胞的凋亡、分化与增殖过程，但由于所研究样本例数有限，具体机制仍须进一步研究。
4抗凋亡机制
凋亡机制在PNH克隆增殖中的作用也是PNH发病机制研究的热点之一。目前，关于PNH克隆是否具有抗凋亡优势还存在分歧。有研究发现，在体外无Fas抗体及配体诱导的条件下培养，PNH患者粒细胞的凋亡率明显低于正常对照者，且PNH克隆也具有抵抗TNF-α和IFN-γ等的凋亡诱导作用。
Chen等通过将分选后的PNH患者GPI+CD34+细胞和GPI－CD34+细胞及正常对照组CD34+细胞进行培养，然后测定其凋亡率和Fas的表达，发现PNH患者GPI+CD34+细胞的凋亡率和Fas的表达明显高于GPI－CD34+细胞，而PNH患者GPI－CD34+细胞与正常对照组CD34+细胞都为相似的低水平凋亡率。上述实验结果提示，PNH克隆的扩增优势可能是由于PNH患者的GPI+CD34+细胞对凋亡高度敏感而产生机体对PNH克隆的选择。最近又有研究发现一些抗凋亡基因(humanA1、Hhr23B、Mcl-1、RhoA)在PNH患者有显著的高表达，但这些基因是否降低PNH克隆的凋亡率，目前尚无相关研究。
综上所述，PIG-A基因突变导致GPI－锚连蛋白缺失而引起的血管内溶血机制已十分明了，但何种机制导致PNH克隆的增殖优势目前仍未阐明。目前为止，PNH尚无有效治疗方法，新近报道的单克隆抗体eculizumab通过抑制补体终末阶段的级联放大反应，可有效控制PNH的溶血及其其他症状，但此抗体从根本上保护了PNH克隆的形成，并不能根治PNH。通过对PNH克隆增殖发病机制的深入研究，可能会探索到减弱PNH患者体内的PNH克隆的有效治疗方法。
