用组合引物PCR法简便快速筛选阳性正向克隆【通用3篇】

用组合引物PCR法简便快速筛选阳性正向克隆 篇一

引言:

克隆技术在分子生物学研究中得到广泛应用,但是筛选阳性正向克隆一直是一个耗时且费力的过程。为了解决这个问题,我们采用了组合引物PCR法,该方法能够快速、简便地筛选阳性正向克隆。

方法:

1. 设计引物:根据目标基因的序列设计一对引物,其中一个引物含有目标基因序列的一部分,另一个引物含有目标基因序列的另一部分。

2. PCR反应:将目标基因的DNA作为模板,加入设计好的引物和PCR反应体系,进行PCR反应。

3. 扩增产物分析:将PCR反应产物进行琼脂糖凝胶电泳分析,观察是否出现目标大小的DNA条带。

4. 筛选阳性正向克隆:根据PCR反应产物的结果,筛选出含有目标基因的阳性正向克隆。

结果:

我们使用了组合引物PCR法筛选了一批克隆,其中包括阳性和阴性对照。经过PCR反应和琼脂糖凝胶电泳分析,我们成功地筛选出了阳性正向克隆。这些克隆经验证后,证明了组合引物PCR法的有效性和可靠性。

讨论:

组合引物PCR法的优点在于它简便、快速,并且能够准确地筛选出阳性正向克隆。相比于传统的筛选方法,该方法节省了大量的时间和劳力。此外,该方法还可以根据需要设计多对引物,用于筛选不同的目标基因。

结论:

组合引物PCR法是一种简便、快速筛选阳性正向克隆的有效方法。它可以广泛应用于分子生物学研究中,为克隆技术的应用提供了便利和效率。

用组合引物PCR法简便快速筛选阳性正向克隆 篇二

引言:

克隆技术在分子生物学研究中起着重要的作用,但是筛选阳性正向克隆一直是一个繁琐的过程。为了解决这个问题,我们采用了组合引物PCR法,该方法能够简便、快速地筛选阳性正向克隆。

方法:

1. 引物设计:设计一对引物,其中一个引物含有目标基因序列的一部分,另一个引物含有目标基因序列的另一部分。确保引物的特异性和互补性。

2. PCR反应:将目标基因的DNA作为模板,加入设计好的引物和PCR反应体系,进行PCR反应。优化PCR反应条件,包括温度、时间和引物浓度等。

3. 扩增产物分析:将PCR反应产物进行琼脂糖凝胶电泳分析,观察是否出现目标大小的DNA条带。

4. 筛选阳性正向克隆:根据PCR反应产物的结果,筛选出含有目标基因的阳性正向克隆。

结果:

我们使用了组合引物PCR法筛选了一批克隆,包括阳性和阴性对照。经过PCR反应和琼脂糖凝胶电泳分析,我们成功地筛选出了阳性正向克隆。经过验证,这些克隆确实含有目标基因。

讨论:

组合引物PCR法是一种简便、快速筛选阳性正向克隆的有效方法。相比于传统的筛选方法,该方法能够节省大量的时间和劳力。此外,该方法还可以根据需要设计多对引物,用于筛选不同的目标基因。

结论:

组合引物PCR法是一种简便、快速筛选阳性正向克隆的可靠方法。它在克隆技术的应用中具有广泛的应用前景,并为分子生物学研究提供了便利和效率。

用组合引物PCR法简便快速筛选阳性正向克隆 篇三

用组合引物PCR法简便快速筛选阳性正向克隆

PCR扩增的.小片段DNA用T载体连接.转化受体菌后观察不到典型的蓝/白斑.用插入片段的特异性引物对菌落进行PCR来筛选阳性正向重组于,测序

鉴定结果吻合率达100%,说明当利用颜色特性挑选阳性克隆成为困难时,菌落PCR技术是一种简单、快速、可靠的筛选方法.

作 者:徐意 XU Yi 作者单位:天津生物工程职业技术学院,天津,300462 刊 名:重庆科技学院学报(自然科学版)英文刊名: JOURNAL OF CHONGQING UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY(NATURAL SCIENCES EDITION) 年,卷(期): 200911(3) 分类号: Q503 关键词:组合引物PCR法 蓝/白斑筛选方法 外源DNA插入方向 T载体克隆 菌落PCR

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